Niezrównane profilowanie transkryptomu z ultra małych ilości RNA

Sekwencjonowanie RNA (RNA-Seq) zrewolucjonizowało analizę ekspresji genów, zapewniając bezprecedensowy wgląd w złożoność transkryptomu różnorodnych rodzajów komórek. Mimo, że obecne metody RNA Seq wymagają znacznie mniej RNA niż inne metody analizy ekspresji genów, nadal są niewystarczające przy analizie próbek o bardzo ograniczonej ilości materiału. Możliwość badania wyjątkowo rzadkich lub cennych próbek – w tym komórek macierzystych, krążących komórek nowotworowych i biopsji tkanek mózgu wymaga metod niezwykle czułych i powtarzalnych. W tym celu, Clontech ® nawiązała współpracę z Illumina w ramach swojej sprawdzonej technologii SMARTer

Technologia SMARTer

Wydajna: Protokół w jednej probówce zintegrowany z analizą ekspresji genu w sekwenatorach Illumina.

Czuła: Synteza cDNA już z 10 pg całkowitego RNA

Solidna: Wysoka powtarzalność między próbkami

Dokładna: Całkowite pokrycie transkryptomu

Opatentowana przez Clontech rewolucyjna technologia SMART (Switching Mechanism At the 5′ end of RNA Transcript) zapewnia wyjątkowo wydajną i dokładną syntezę pełnej długości cDNA w jednej reakcji. SMARTer Ultra Low RNA Kit dla Illumina łączy ugruntowane aspekty zestawów SMARTer ze zoptymalizowaną techniką specjalnie zaprojektowaną dla zgodności z sekwenatorami Illumina. Technologia SMART zapewnia nieporównywalną czułość i pełną amplifikację transkryptów mRNA, wzbogacając w transkrypty o pełnej długości i utrzymując rzeczywistą reprezentację genów w próbce badanej, te czynniki są krytyczne dla sekwencjonowania transkryptomu i analizy ekspresji genów.

Technologia SMART jest używana do syntezy pełnej długości cDNA wykorzystując aktywność terminalnej transferazy i zdolność zmiany matrycy odwrotnej transkryptazy MMLV (Moloney Murine Leukemia Virus RT): Po osiągnięciu przez RT końca 5′ matrycy RNA, RT dodaje kilka dodatkowych nukleotydów do końca 3′ cDNA. Starannie zaprojektowany SMARTer II oligo następnie hybrydyzuje do tych dodatkowych nukleotydów na podstawie komplementarności zasad, tworząc rozszerzoną matrycę. Następnie RT przełącza matrycę i kontynuuje transkrypcję do końca oligonukleotydu. Uzyskany pełnej długości cDNA posiada pełną sekwencję końca 5′ mRNA oraz sekwencję kontrolną, która służy jako uniwersalne miejsce startowe dla syntezy drugiej nici cDNA i amplifikacji przez LD-PCR.

Wybierz swój zestaw